颜杰 谷长平赵涛 王月兰
山东第一医科大学第一附属医院麻醉科（山东省千佛山医院），济南 250014
国际麻醉学与复苏杂志,2022,43(06):566-570.
DOI：10.3760/cma.j.cn321761-20220209-00559
基金项目
国家自然科学基金（82070078）；
山东省泰山学者特聘专家计划（ts20190981
ORIGINAL ARTICLES
【论著】
本研究拟评价沉默信息调节因子1（sirt1）在小鼠机械通气致肺组织炎症反应中的作用。
1 材料与方法
SPF级健康雄性C57BL/6N小鼠40只，8周龄，体重20~25 g，采用随机数字表法分为4组（每组10只）：假手术组（S组），小鼠仅插管不进行机械通气；机械通气相关性肺损伤（VILI）组（M组），小鼠插管后进行机械通气；sirt1敲低组（si‑sirt1组），小鼠体内转染sirt1小干扰RNA；sirt1敲低+VILI组（si‑sirt1+M组），小鼠体内转染sirt1小干扰RNA后再机械通气。
机械通气参数为：通气频率60 次/min，潮气量28 ml/kg，FiO2 21%，吸呼比1∶2，时间4 h。机械通气结束后处死小鼠，收集肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）：采用ELISA法测定BALF中IL‑1β和IL‑6浓度，肺组织H‑E染色后观察病理学结果，计算肺组织湿重干重比（wet/dry, W/D），采用ELISA法检测肺组织中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平，Western blot法检测肺组织sirt1、连环蛋白p120和紧密连接蛋白occludin的水平。
2 结 果
2.1 肺组织损伤病理改变
与S组比较，M组、si‑sirt1组、si‑sirt1+M组肺组织出现明显损伤改变；与M组比较，si‑sirt1+M组肺组织损伤改变加重。见图1。
2.2 W/D、IL‑1β、IL‑6水平比较
与S组比较，M组、si‑sirt1组、si‑sirt1+M组W/D、IL‑1β、IL‑6水平升高（P<0.05）；与M组比较，si‑sirt1+M组W/D、IL‑1β、IL‑6水平升高（P<0.05）。见表1。
2.3 sirt1、p120、occludin蛋白水平比较
与S组比较，M组、si‑sirt1组、si‑sirt1+M组肺组织sirt1、p120、occludin蛋白水平下调（P<0.05）；与M组比较，si‑sirt1+M组sirt1、p120、occludin蛋白水平下调（P<0.05）。见图2。
2.4 MDA和SOD水平比较
与S组比较，M组、si‑sirt1组、si‑sirt1+M组肺组织MDA水平升高，SOD水平降低（P<0.05）；与M组比较，si‑sirt1+M组肺组织MDA水平升高，SOD水平降低（P<0.05）。见表2。
3 讨 论
本研究结果显示，小鼠机械通气4 h后肺组织occludin和p120蛋白水平下调，肺组织出现明显损伤改变，W/D及BALF中IL‑1β、IL‑6水平均明显升高，提示小鼠肺组织炎症反应增强，VILI模型制备成功。给予小干扰RNA制备sirt1敲低小鼠模型，结果显示小鼠体内转染si‑sirt1后肺组织中sirt1的水平下调，提示sirt1敲低小鼠模型制备成功。
本实验中小鼠敲低sirt1后，机械通气4 h时肺组织occludin和p120蛋白水平下调的程度加重，肺组织损伤更加严重，W/D及BALF中IL‑1β、IL‑6水平升高更加明显。敲低sirt1加重了大潮气量机械通气引起的肺组织炎症反应和肺损伤，提示sirt1可以调控机械通气时肺组织的炎症反应。
本研究对小鼠大潮气量通气4 h后的氧化应激状态进行了评估。结果发现，M组较S组的肺组织匀浆MDA水平明显增高，而SOD水平降低，说明大潮气量机械通气可以引起肺组织的氧化应激和氧化损伤；小鼠体内转染si‑sirt1后再进行大潮气量机械通气，与M组比较，si‑sirt1+M组肺组织中MDA水平进一步升高，而SOD水平降低。敲低sirt1后加重了大潮气量机械通气引起的氧化应激，说明sirt1可以调控机械通气过程中小鼠肺组织的氧化应激。
